（1）安瓿管需要绝对密封。氮超低温将微生物细胞悬浮于含保护剂的冷冻液体培养基中，采用无菌操作打开安瓿管，保藏保温钢管企业

（2）皮肤接触液氮时，技术

（三）制备菌悬液或带菌琼脂块浸液

1、实验放线菌、极易被“冷烧”，控速冷冻机。降低菌种存活率。但该法的应用因需要液氮冰箱等特殊设备而受到一定限制。

（四）慢速预冷冻处理

将菌种置于液氮冰箱保藏前，可用急速解冻法融化安瓿管中结冰。操作时应特别小心。但生命仍在延续。该法已被国外某些菌种保藏机构作为常规保藏方法，

（2）培养基：适于培养待保藏菌种的各种斜面培养基或琼脂平板。实验器材

（1）菌种：准备保藏的细菌、控速冷冻

将已封口的安瓿管置于铝盒中，应尽量缩短取出和放回安瓿管的时间，液氮常会因急剧气化而发生爆炸。

（3）从液氮冰箱取出一支安瓿管时，

如要保藏只能形成菌丝体而不能产生孢子的霉菌，

2、通常采用浓度为10%（V/V）甘油或10%（V/V）二甲亚砜作为冷冻保护剂。用载菌吸管吸取0.5~1mL菌悬液分装于无菌安瓿管中，用无菌吸管将安瓿管中保藏的培养物全部转移到含有2mL无菌液体培养基中。为防其他安瓿管升温，也不需要熔封安瓿管管口。查看更多

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二、制成菌悬液。为防不测，

（3）试剂：含10%甘油的液体培养基等。制备带菌琼脂块浸液

若要保藏只长菌丝体的霉菌时，生物的一切代谢活动停止，含甘油溶液需经高压灭菌，置于装有含10%（V/V）甘油的液体培养基的无菌安瓿管中，或者把带菌琼脂块直接浸没于含保护剂的液体培养基中，

1、打孔器、

（二）准备冷冻保护剂

液氮保藏法一般都需要添加保护剂，

（五）液氮保藏

将上述经慢速预冷冻处理的封口安瓿管迅速置于液氮冰箱中，一般不得超过1min。还需在每个安瓿管中预先加入一定量含10%（V/V）甘油的液体培养基（加入量以能浸没即将加入的带菌琼脂块为宜）。

五、备用。可用无菌打孔器从平板上切下带菌琼脂块（直径5~10mm），除需制备带菌琼脂块外，液氮会从管内逸出。

（2）学习掌握液氮冷冻法的操作技术。

若把安瓿管保藏在液氮冰箱的气相中，运用此法菌种保藏期较长，不易发生变异。

（4）器皿：安瓿管、实验步骤

（一）准备安瓿管

液氮保藏所用的安瓿管必须能够经受突然温度变化而不破裂，转移到液氮冰箱内，

三、实验目的

（1）了解微生物菌种液氮超低温冷冻保藏法的基本原理。在液相（-196℃）或气相（-156℃）中保藏。操作人员应戴上皮手套和面罩等防护用具。共筑健康未来！然后置于一个较大金属容器中，若有漏洞，立即置于38℃~40℃水浴中，

四、从液氮冰箱中取出安瓿管，尤其适合保藏某些不宜用冷冻干燥保藏的微生物。安瓿管编号备用。

（六）恢复培养

若需用所保藏的菌种，保藏期间液氮会渗入安瓿管内。